3.2 饲料中蛋白质的测定

3.2.1 样品来源饲料市场采集的具代表性饲料样品10 个。

3.2.2 样品处理将样品粉碎后经40 目筛过滤, 准确称取0.2 g( 精确至0.0002 g) 饲料样品于具塞试管中, 加入10 % KOH 溶液10 mL, 沸水浴30 min, 冷却后用蒸馏水定容至25 mL, 过滤。取饲料过滤液0.5 mL, 以蒸馏水补齐至1.0 mL, 加4.0 mL 双缩脲试剂, ( 37±0.2) ℃反应30 min。以空白管调零, 在540 nm 处测定吸光值, 依据标准曲线, 求得浓度值。计算公式如下:饲料样品蛋白质含量(%) =C×2×25/W×1000。式中, C 为经标准曲线求得的浓度值(mg/mL) ;W为饲料样品重量( g) 。

4 结果与分析

4.1 不同饲料样品的对比实验结果见表1。从表1 可以看出, 双缩脲法对饲料蛋白质含量的测定结果与凯氏定氮法测定结果, 相差较大, 比凯氏定氮法所测值低15.1 %( 5.8 % ～31.7 %) 。孙建平和侯彩云( 2005) 认为双缩脲法的测定结果比凯氏法小10 % ～20 %。凯氏定氮法测得的蛋白质含量是粗蛋白质, 即含氮量乘以6.25, 其中包括无机氮和氨基酸。双缩脲法测得的蛋白质含量是真蛋白质。是碱溶液所能溶解的蛋白质, 并且与双缩脲反应转为络合物的显色部分; 而不溶解的那一部分蛋白质和双缩脲试剂的反应很少, 即使有反应, 产生的有色络合物经过滤并不存在于最终的比色液中。因此, 比色测定中读出的吸光度值, 只是可溶蛋白质形成的有色络合物的吸光度值。另外, 饲料中添加的蛋白质原料较为复杂, 有豆粕、花生粕、棉籽饼、菜籽饼、鱼粉、羽毛粉等。测定中虽经过粉碎、过筛、碱液煮沸, 但有些蛋白质仍难溶于测试液中, 与真实值相比产生较大误差。并且饲料中含有大量的粗纤维, 对于粗纤维含量较高的样品, 双缩脲法测定结果不十分稳定。

4.2 在牛奶、豆浆、牛血清中的对比实验结果见表2。从表2 可以看出, 利用双缩脲法测定牛奶、豆汁、牛血清蛋白质含量与凯氏法测定结果较为接近, 因为这些样品中所含蛋白质溶解度较高,所含蛋白质种类相对较少, 其性质与标准蛋白液接近。

4.3 双缩脲法测定饲料蛋白质含量精密度实验对5 号、6 号饲料样, 分别取6 个样品用双缩脲法测定蛋白质含量, 结果见表3。从表3 可以看出,双缩脲法对同一饲料样品的平行测定结果, 重现性较好, 精密度较高。符合国标规定蛋白质测定结果的相对偏差范围, 但平均值与凯氏法结果差距较大。

5 小结

双缩脲法测定饲料蛋白质虽然不经消化, 不产生有害气体, 但并不省时。饲料中淀粉经碱溶液及加热处理而糊化, 难以过滤, 尤其配合料淀粉含量高, 2 h 只能过滤1 ～2 mL( 浓缩料相对较快) ,且此法受工作环境( 温度等) 影响较大, 若每次作标准曲线就更费时。饲料中成分复杂, 某些离子对显色反应会产生影响, 这也是结果不稳定的原因。

综上所述, 双缩脲法不适于配合饲料和浓缩饲料蛋白质含量的测定。