如何简化叶绿素含量测定步骤

叶绿素含量是反映植物特别是光合机构生理状况的一个基本指标,植物生理研究中经常涉及叶绿素含量的测定。一般的测定方法都包括叶片称重、研磨、冲洗、过滤和定容(25 mL或更多)及稀释等繁琐步骤,既费时间,又费溶剂,不适于科学研究中大批量样品的测定,特别是以叶片鲜重表示的叶绿素含量,不仅容易受叶片含水量变化的干扰,给测定结果带来偏差,而且也不便于同以单位叶面积表示的光合速率联系起来分析两者的关系。目前已经有很多新的方法出现，如叶绿素仪测定法，和本文要讲到的叶丝浸提法。其中叶绿素仪法比较简单，直接将便携式叶绿素仪带到田间，夹在叶片正反面，然后按下测试键，就可也得到SPAD值，SPAD值代表的是叶片的叶绿素含量值。另外SPAD和氮元素含量也有一定的关系，可以指导施肥。正因为测出的值是SPAD值，叶绿素仪又可以叫做SPAD502叶绿素仪。

叶丝浸提法包括取样、浸提、比色和计算。以前一般采用的研磨过滤方法提取叶绿素,不仅费时间,从称重到定容结束,1个样品至少需要10min,而且由于不可避免的损失,所得到的结果一般会低一些;而用本文中的叶丝浸提法,不算浸提的等待时间,从取样、切细到投入80%丙酮浸提的操作时间一般不超过1~2min,而且可以避免过滤造成的损失。从用两种方法测定的结果可以看到,用叶丝浸提法得到的叶绿素提取液可以直接用于比色测定光密度,不需要过滤或离心。虽然在用叶片细丝的浸提液中含有少量浸出物的杂质,但由于其对比色波长的光没有明显的吸收,所以测定的结果受到的影响并不明显。另外，叶片水分含量的不同，也会造成叶绿素含量的不同，一般，含水量高的叶片，其叶绿素含量明显降低，这个我们在具体操作时是需要注意的。