几种叶绿素含量测定方法比较

叶绿素含量是植物生长过程中一个重要的生理指标,由于其对周围环境很敏感,并与植物的光合作用、营养吸收等密切相关,被广泛作为植物生长的常规测定指标项目。叶绿素含量的测定方法有多种,在国际上以传统的Arnon法(也称研磨法)应用最为广泛。但该法需要把植物材料研磨并经转移、过滤或离心处理,不仅工作量大,而且不可避免地使试验人员较长时间与挥发于空气中的试剂相接触,对人体损害较大。近年来,直接浸取法受到重视,张宪政等用不同配比的混合液对叶绿素进行提取,证明了用混合液提取的可行性。李得孝,吴志旭等对传统的Arnon法进行了改进,将样品冷冻处理后,用50℃丙酮静置提取并进行测定,极大提高了工作效率。

(1)研磨法。称取0. 5 g样品于研钵内,加入少量CaCO3和5 mL 80%的丙酮,将材料充分研磨细碎直至变白(约5 min),转移至10 mL具塞离心管中,定容至刻度,摇匀后置于4℃冰箱中静置12 h,离心10 min (2000 r/min),取上清液测定。(2)直接浸取法。称取0. 5 g样品放入10 mL具塞离心管中,用80%丙酮定容至刻度,于暗柜中静置72 h浸取,取上清液测定。(3)样品冷冻后用50℃提取液提取法。称取0. 5 g样品于10 mL具塞离心管中,置冰箱中冷冻2h,取出后加入10mL在水浴锅中加热至50℃的80%丙酮,充分振摇后于暗柜中静置4h,取上清液测定。（4）叶绿素计法：叶绿素计是所有方法中最快捷的，你只需手持叶绿素计，将叶片插入仪器的感应部位，然后合上测量探头即可。应用于这种测定的仪器又被叫做便携式叶绿素仪，因为该叶绿素计拥有小巧的机身，仅200g的重量，可以方便地装入口袋并带到现场进行测量。

在以上几种测定方法中，直接浸取法提取效果最好,但耗时长,传统研磨法叶绿素的损失较大,冷冻后用50℃提取液提取法操作简便且提取速度较快,在提取率和稳定性方面均显示良好的优越性。冷冻后用50℃提取液提取法的最优试验条件为将试验材料冷冻1 h后,静置提取3 h。而叶绿素仪法，则相较于其他三种化学方法，更加快速方便。而且用SPAD-502测定叶绿素含量时，不会对叶片造成损伤，这也是使用叶绿素计的另一大好处。因为你不需要摘下叶片，直接用仪器夹住叶片测定即可，这样就可以在作物的生长过程中全程对特定的叶片进行监测，从而得到更科学的分析结果。