如何测定樱桃中叶绿素含量

叶绿素是光合作用最重要的产物，同时叶绿素的含量也是植物重要的生理指标之一。因此，对樱桃叶绿素提取方法的研究意义重大。早期叶绿素测定广泛采用Arnon法，该方法由于先研磨后除渣，工作量大，步骤多，且容易受光氧化而引起偏差，不适宜田间大量样品的提取和测定。陈福明和张宪政等分别对丙酮、乙醇和水不同配比混合液浸提效果进行了深入的研究，得出适宜提取叶片叶绿素的混合液。洪法水等研究认为，用丙酮和乙醇的混合液提取植物叶片叶绿素比单一提取液效果要好。而徐邦发等为解决通常采用分光光度计费工耗时、易引起离体叶绿素的光分解而造成误差等问题，另外还有现在很通用的叶绿素测定仪法。叶绿素测定仪是通过将叶片夹入仪器头部，然后按下头部就可以得到叶片叶绿素含量。非常方便。叶绿素测定仪有时也被叫做叶绿素含量仪，SPAD502就是一款最为典型同时也是测定最为方便的叶绿素测定仪。通过比较几种不同混合提取液的提取，提出测定棉花叶片叶绿素含量的丙酮溶液浸提法，该法具有准确、简单易行的优点。

实验过程：试验试剂：乙醇、丙酮、正丁醇（均为分析纯）、石英砂。试验仪器与器皿：千分之一电子分析天平、紫外可见分光光度计、剪刀、研钵、移液管、漏斗、大试管。提取液：80%的丙酮、95%的乙醇、正丁醇、80%的丙酮和95%乙醇的5种混合液（配置比例分别为3∶1，2∶1，1∶1，1∶2，1∶3）8个处理。在栽培的“龙田晚红”樱桃树中选取有代表性的叶片20片，将其洗净、吸干、去大叶脉，之后称取0.1g叶片加入5mL丙酮和少量的石英砂在研钵中进行研磨，匀浆后过滤（用80%丙酮清洗研钵及残渣，合并滤液），滤液用不同的有机试剂定容至10 mL，放入棕色瓶中，再分别加入各种提取液10 mL，放在避光处浸泡叶片24 h，重复3次。用1∶1的80%丙酮和95%乙醇混合液，从2 h开始，每隔2 h用紫外可见分光光度计进行比色，分别在波长为645，663 nm下进行光密度值测定。根据Lamber-Beer定律，叶绿素a、叶绿素b与不同波长下光密度值之间的关系式如下。叶绿素a的含量（mg/g）=（12.71A663-2.59A645）V/W×1000；叶绿素b的含量（mg/g）=（22.88A645-4.67A663）V/W×1000；叶绿素的总含量（mg/g）=（20.29A645+8.04A663）V/W×1000；式中，A645，A663分别为相应波长下的光密度值，V为提取液的体积，W为叶片质量。