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植物体内蛋白质氮测定的原理和步骤

来源: http://www.grainyq.com/  类别:实用技术  更新时间:2012-11-23  阅读
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植物体内的氮化物可分为蛋白质氮和非蛋白质氮两大类。二者的含量和比例,随着植物的生理状况及环境条件的不同而发生变化。所以,测定两类氮化物含量的变化动态,对研究植物在不同情况下,氮素的吸收、运转和代谢规律,以及确定农产品的品质、营养价值等具有一定意义。

一、测定原理

在进行氮化物系统测定时,首先要将各类氮化物进行分离,分别消化,将非氨态氮转变为氨态氮。然后,用测氨态氮的方法进行测定。

1.分离:用三氯乙酸浸提样品时,蛋白质沉淀析出,而非蛋白质则熔解在三氯乙酸中,然后分别测定沉淀物及滤液中的氮量,即可求出蛋白氮和非蛋白氮的含量。’

2.消化:当植物材料与浓硫酸一起加热时,硫酸分解成为二氧化硫、水和原子态氧,将有机物氧化分解生成二氧化碳和水。反应为:

硫酸分解成为二氧化硫、水和原子态氧,将有机物氧化分解生成二氧化碳和水

蛋白质在硫酸作用毛分解成氨基酸。氨基酸继续分解生成氨,氨与硫酸结合形成硫酸铰。反应为:

蛋白质在硫酸作用毛分解成氨基酸。氨基酸继续分解生成氨,氨与硫酸结合形成硫酸铰(1)

蛋白质在硫酸作用毛分解成氨基酸。氨基酸继续分解生成氨,氨与硫酸结合形成硫酸铰(2)

为了加速消化进程,加入硫酸钾及还原性催化剂硫酸铜。硫酸钾可大大提高氧化能力及增高硫酸的沸点。

二、测定步骤

1.分离提取:①在分析夭秤上准确称取磨碎过筛的风干样品0.1~0.5克(视含氮量而定),放入100毫升带塞磨口三角瓶中,加20毫升吞万的三氯乙酸,置振荡机上振荡提取一小时。然后用漏斗过滤,滤液直接渔入克氏瓶中,用三氯乙酸将三角瓶中样品冲洗数次,每次用量10毫升,把样品残渣全部移入漏斗中,滤液全部滤入克氏瓶内(冲洗液最不要过多)。②将瓶内的滤液浓缩至3、5毫升,用以测定非蛋白氮.再将漏斗中沉淀连同滤纸一道放入另1个克氏瓶中,用以测定蛋白氮,并取同样重量的嫩纸一张,放在第三个克氏瓶中,作空白测定。

2.消化:①向以上样品及空白测定的克氏瓶中各加入浓硫酸3、6毫升,混合催化剂0.3、0.5克(如用比色法测定氮,消化时不必加催化剂,而用幼万的过氧化氢促进载化)。加好后,盖上小漏斗,浸泡样品数小时或1夜。这样,可以减少泡沫,防止外溢。②开始消化时火焰宜小,待有二氧化硫气体出现后,逐渐升温,使内容物达到曦沸。在消化过程中,瓶巾的颜色将发生以下的变化。黑、深棕一浅棕一黄一绿,蓝绿在消化过程中,须经常转动克氏瓶。当溶液变成浅棕色时,如果瓶璧还附有黑色倾拉时,可以将瓶适当揭动使黑粒洗下。继续加热。至溶液呈清亮的蓝色后,再加热10分钟俏化完毕。此时样品中的蛋白氮和非蛋白氮化物全部转变为氨态氮。③待瓶冷却后,向其中加10毫升蒸馏水,摇匀,并小心倒入10D毫升容量瓶中。再以少最燕馏水稀释至刻度,混匀备用。

3.氮的测定:氮的测定可用KDN系列定氮仪法,也可以用次卤酸氧化法成其它比色法。

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