凯氏定氮法的操作步骤与原理介绍

　　直至今日为各国、各行业、各学科公认的氮蛋白质测定方法是1883年丹麦科学家厂JohanKJeldahl创立的，被后人命名为凯氏(定氮法，被许多国际组织定为标准方法，如国际谷物化学协会、美国分析化学协会，美国谷物化学协会等，我国十多年来颁布的有关“谷物、豆类作物种子粗蛋白测定”，“上壤肥料全氮测定”，以及食品、饲料工业中的蛋白质测定等等，都将凯氏定氮蛋白质方法定为标准化分析方法。

　　凯氏定氮仪方法创立100多年来，其原理、步骤没有多大变化，但随着仪器仪表工业的发展，凯氏法所涉及的消煮、蒸馏、滴定这三步骤所用的仪器设备都已相当完备，且从手工操作发展到半自动和全自动，大大提高了测定速度和精度，也改善了工作条件，使凯氏定氮法进人了一个新阶段。

　　凯氏法的原理是将待测样品放在高温浓硫酸中消煮分解，使样品中的蛋白氮及其他有机氮转化为钱态氮，然后加碱蒸馏，使氨释放出来并吸收于标准酸中，再用滴定法测定全氮量，进而可换算出蛋白质含量，所以，凯氏法和主要部件分为3部分。

　　1、消煮

　　即将样品和加速剂(KZSO4)、催化剂(euso;或se)、浓硫酸放在凯氏消煮管中、置于消煮器上，逐步加温至380一400℃，使有机质中的氮能充分消解而又不损失的条件下沸腾消煮，有机氮转化为钱态氮，钱态氮与浓硫酸反应生产成硫酸钱。

　　上述过程中的主要设备是消煮器，早期用调温电炉或电热板，80年代初期改用电阻丝加热铝块管式消煮炉，而现在ll(Il).J外均改为生产并推广应用多功能远红外消煮器，其热效率高，升温快，温度均匀，控温方便、准确，有的消煮器上附加有烟雾导出系统，使消煮器不必安放在通凤橱内工作。

　　2、蒸馏

　　经上述消煮所得的消煮液一(NH4)2504加少量蒸馏水，再加碱(Na0H)，放入蒸馏器中，然后通蒸气蒸馏，使氨气释放出来。

　　蒸馏过程在蒸馏器内完成，由一于蒸馏前要加人Na0H溶液，在蒸馏过程中又必须通人足够且稳定的蒸气，所以蒸馏器由自动准确的加碱系统和白动产生并稳定输出蒸气系统组成。加碱系统主要由碱液箱、排量准确的微排量薄膜泵、碱阀及管路组成。该系统的主要技术要求是耐强碱腐蚀、化学稳定、排量准确。

　　蒸气系统主要由蒸气发生器、蒸气阀及管路组成，要求能产生蒸气量足够且稳定，为此其中必配有平衡与调节发生器内气压的的装置，例如膨胀器。此外蒸馏器中还有水路系统、冷凝系统、接收瓶和电气控制器。

　　3、滴定

　　蒸馏过程中获到的氨可吸收于装有标准酸(盐酸或硫酸)的瓶中、然后用标准碱液滴定过量的酸，求出含氮量。目前使用得更多的是将氨吸收到一定量的硼酸中，再用标淮酸滴定，从而求出含氮量，其优点是只需一种标准浓度的溶液，且不受空气中二氧化硫的影响。