蛋白质测定仪之原理大解构
来源: 本站 类别:实用技术 更新时间:2010-08-13 阅读次
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蛋白质测定仪之原理大结构
蛋白质是含有氮的有机物,而且氮在蛋白质含量中占有一定的比例,正因为如此,我们可以通过氮的含量,来粗略计算蛋白质的含量。一般的,蛋白质中氮的含量可以达到15-17%。因此,蛋白质测定仪又俗称为自动定氮仪。那么,既然我们知道蛋白质是含氮有机物,我们只需测定样品中氮的含量,就可以算出蛋白质的质量,那如何测定样品中氮的含量呢?
在化学反应中,我们知道含氮有机物在催化剂如硫酸铜、硫酸钾的作用下,会和浓硫酸反应生成氨气逸出,反应方程式如下:含氮有机物+H2SO4------>CO2+H2O+NH3,此时氨气又被浓硫酸吸收,生成硫酸铵:2NH3+ H2SO4------>(NH4)2SO4。这是消化过程,在自动定氮仪的消化炉内完成,我们只需将浓硫酸沿消化管壁倒入样品,然后将消化管放入消化炉内,大约消化40分钟后,消化过程就完成了。
当样品完成消化过程后,我们将消化管转移到蒸馏器中。然后往消化管内缓缓注入浓的氢氧化钠。在注入氢氧化钠之前可在消化管内放入少量蒸馏水,防止浓硫酸与氢氧化钠间的剧烈反应。此时,在消化管内,氢氧化钠与硫酸铵反应,生成氨气。方程式如下:(NH4)2SO4+NaOH------> NH3+ H2O +Na2SO4 。这一步在蒸馏器内完成,此时消化管内会有不断的气体出现,其实是水蒸气通过管子进入,一方面为了加速与氢氧化钠的反应,另一方面,将氨气气化,使其转移到右边的锥形瓶中。而锥形瓶中放的是硼酸。当氨气经过上面的冷却管,进入锥形瓶中时,此时反应为:NH3 + H+ +H2BO4------>NH4H2BO4。到此,氨气已经完全被硼酸吸收,蒸馏过程结束。然后往锥形瓶中滴入稀的盐酸,进行滴定。
通过以上过程,我们只需计算滴定时消耗的酸的量,就可以求得氮的含量,而氮的含量与蛋白质的含量有着一定的比例关系,通常的,一克氮相当于6.25克蛋白质,这样我们就能计算出蛋白质的含量。
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