蛋白质测定仪操作方法粗谈
来源: 本站 类别:实用技术 更新时间:2010-08-17 阅读次
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蛋白质测定仪操作方法粗谈
蛋白质测定仪是用于测定粮食、食品、乳制品、饮料、饲料、土壤、水等物质中氮或者蛋白质含量的仪器,因为所测出的物质不仅含有蛋白质,同时还含有游离氨基酸、嘌呤、吡啶、尿素、硝酸盐和氨等物质,因此该仪器又被称为粗蛋白测定仪。
蛋白质测定仪包括两个装置:消化炉和蒸馏装置,分别用来消化样品以及蒸馏和滴定。浙江托普生产的蛋白质测定仪的消化炉有多种孔数选择,如4孔、8孔、12孔和20孔,根据消化炉不同孔数,我们可以将定氮仪分为不同的型号。如KDN-04A、KDN-08C等。下面我们具体介绍下蛋白质测定仪在测定蛋白质含量时的操作步骤。
消化:称取经粉碎的样品0.5克(视含氮量而定),放入已洗涤烘干的消化管中,加催化剂5克左右和10ml左右硫酸(如果是固体样品,最好在加浓硫酸前先加3ml左右的蒸馏水以湿润样品,以防止浓硫酸遇到强碱发生剧烈反应)。将消化管放入消化架的各个孔内,然后置于消化炉上,然后开启抽气三通上自来水龙头,使抽气三通处于吸气状态,接通电源开始消煮。消化管有不同的孔数区别,你可以按照样品数的多少来选择。每两个消化炉孔共用一个进出水开关。
蒸馏:(1)打开电源,仪器自动进入加水状态,待加水工作完成后会自动停止。(2)在左边托盘放上空的消化管,右边放上空的三角瓶,打开水龙头开关。为排空管路内空气,实验前请先按下加酸键,待液体流顺畅后停止加酸;加碱同样操作。按下蒸馏键,仪器开始进入蒸馏状态,待蒸气自动从喷射管中喷出并稳定后,关闭开关。在左边托盘放上已消化冷却好的样品,右边托盘放上250ml三角瓶,并使管口碰到杯底。再打开电源,依次按加酸、加碱、蒸馏键对样品进行蒸馏(加酸、加碱量设定自行)。蒸馏完毕后,将三角瓶下移,使接收管离开液面,用水冲洗出气口,继续蒸馏半分钟后,取下三角瓶待滴定用。第二个样品同上方法。(3)关开关,关水龙头,取下消化管,打开侧面排水夹子,把连碱泵的胶管放入蒸馏水容器内,打开电源开关用手按加碱按键抽蒸馏水清洗碱泵,酸泵同样清洗,最后关电结束。
滴定:用0.1 NHCL滴定接收瓶内的溶液,滴定至粉红色时为止,记下消耗HCL的毫升数,按下列式子计算蛋白含量:
蛋白质%=
式中:X—样品中蛋白质的含量,%
V1—样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml;
V2—试剂空白消耗硫酸或盐酸标准液的体积,ml;
N—硫酸或盐酸标准溶液当量浓度;
0.014—1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数;
m—样品的质量(体积),g(ml);
F—蛋白质系数,按16%计算乘以6.25即为蛋白质。
(空白测定:用0.1克糖代替样品或不加样品作空白测定)
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